Hydroxyphenyl fluorescein (HPF)羟苯基荧光素 A5235 1mg -20ºC避光保存
产品描述
氨基苯基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）是由T. Nagano 开发的两种活性氧（Reactive oxygenspecies, ROS）指示剂，比 H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更的特异性和稳定性。APF 和 HPF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF 和 HPF具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em，~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。
本品以粉末形式提供，可直接溶于无水 DMF 配制成 5mM 储存液，常用工作浓度范围1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
产品特性
1） CAS NO.：359010-69-8
2） 同义名：3'-p-(hydroxyphenyl) fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素
保存与运输方法
保存：-20ºC 避光干燥保存，至少 1 年有效。运输：冰袋运输。
使用方法
一、 储存液制备
将低温保存的 1mg 粉末置于室温回温至少 20min，之后加入 471μl 无水 DMF 配置成 5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20ºC 避光干燥保存，避免反复冻融。
【注】：HPF 能溶于 DMSO（10mM），但有数据显示 DMSO 是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。建议用DMF作为溶剂。
二、 溶液体系检测
正式实验前，取一管HPF 储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS 缓冲液， PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为 1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
三、 细胞体系检测
以下实验步骤仅做参考，的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入 HPF工作液之前按需处理细胞。
1）根据具体用量，将DMF 储存液用 HHBS 缓冲液或其他生理缓冲液稀释成 1-10μM 工作液。
2）根据实验设计处理细胞（比如，RASM 细胞用 50-100nM 血管紧张素II 处理3-5h）。
3）取步骤 1）准备的 1-10μM 工作液加入细胞，37ºC 孵育 20-60min。
4）吸掉染色工作液，用HHBS 或其他生理缓冲液替换。
5）用合适的荧光仪器（Ex/Em=492/515nm）来检测。
【注 1】：BSA 和酚红会影响荧光，需谨慎使用。
【注 2】：HPF 和 APF 能用于溶液体系或胞内 ROS 检测。
注意事项：
1）APF 和 HPF 仅用于科研研究，不可用于体外诊断研究。
2）APF 和HPF 产生的荧光相对于其他活性氧探针比如 DCFH 弱很多，这是探针本身的特性决定的（见附表 1 活性氧探针（HPF,APF, DCFH）对各种活性氧物质的反应特异性）。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
黑龙江久丰生物工程有限公司
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